Aparat do izolacji kwasów nukleinowych QuickGene-Mini480 (Kurabo QuickGene-Mini480 .pdf) (Kurabo, dawniej FujiFilm, Japonia) jest manualnym systemem do szybkiej izolacji DNA/RNA z różnorodnych próbek, pozwalający na uzyskanie próbek o wysokiej jakości i wydajności izolacji przy jednocześnie znikomej fragmentacji izolowanego materiału. Uproszczona budowa aparatu sprawia, że nie zajmuje na stole laboratoryjnym niewiele miejsca.

 

Po wstępnym etapie manualnego przygotowania lizatu i nałożeniu go do kolumienki filtracyjnej, system przeprowadza izolację DNA lub RNA w taki sposób, że odczynniki dozowane są manualnie za pomocą pipet(y), a filtrowanie odbywa się za pomocą 8 głowic ciśnieniowych. Jednocześnie można przeprowadzić od 1 do 48 izolacji, a czas trwania izolacji zależy od sprawności operatora. Dla przykładu, czas izolacji 48 prób nie przekracza 90 minut. ANIMACJA

 

System QuickGene-Mini480 pracuje na dedykowanych zestawach odczynników, w skład których wchodzą również kolumienki reakcyjne o grubości 80 µm, wykonane ze specjalnej porowatej membrany filtracyjnej. Kwasy nukleinowe posiadając właściwości hydrofilowe, są łatwo adsorbowane na membranie posiadającej strukturę gąbki, podczas gdy białka i lipidy o hydrofobowych właściwościach są łatwo odfiltrowywane. Dzięki tej cienkiej membranie sam proces izolacji odbywa się bez etapów wirowania, wystarczy niewielkie ciśnienie przykładane z góry kolumienki. System umożliwia sterowanie intensywnością przykładanego ciśnienia.

O wysokiej czystości wyizolowanych kwasów nukleinowych świadczy wskaźnik: A260/280 > 1,7 dla DNA oraz RNA. Brak zanieczyszczeń takich jak białka i sole chaotropowe pozwala na bezpośrednie użycie wyizolowanych kwasów nukleinowych do aplikacji opartych o PCR, badań transkrypotomicznych używających techniki qRT-PCR lub także bardzie zawansowanych technologii jak sekwencjonowanie, genotypowanie SNP lub analizy epigenomiczne czy też farmakogenetyczne. Użycie ultra cienkich złóż filtracyjnych, nie zawierających włókna szklanego oraz brak konieczności wirowania podczas etapu oczyszczania i elucji kwasów nukleinowych gwarantuje niespotykaną ochronę przed mechanicznymi uszkodzeniami izolowanej matrycy.

Istnieje możliwość dokupienia zestawu statywów umożliwiających pracę z dużymi ilościami materiału do izolacji (np. z 2 ml krwi) oraz wymiany w ramach takiego upgradu głowicy umożliwiającej jednaoczesną izolację od 1 do 8 prób. Tak przebudowany system nazywa się QuickGeneMINI8L(Kurabo QuickGene-Mini8L .pdf)

 

Jedną z bardziej użytecznych zastosowań aparatów KURABO są zestawy do izolacji RNA SARS CoV2 z wymazów. Informacje aplikacyjne na ten temat poniżej:

• FUJIFILM Wako_QuickGene_COVID-19_isolation_solution .pdf
• Virus RNA Extraction from swab 2019-nCoV positive control added without Carrier RNA_TCEP_DNase .pdf
• X.Total RNA Extraction from Virus20200206(Mini480 Auto12S. pdf

System ten pracuje na gotowych zestawach odczynników pozwalających na izolację:

- DNA z pełnej krwi

- DNA tkankowego (umożliwia izolacje DNA, również z tkanek FFPE, wymazów z policzka, czy śladowych ilości potrzebnych w aplikacjach medycyny sądowej)

- DNA plazmidowego

- RNA tkankowego

- RNA z hodowli komórkowych

- RNA z komórek krwi

- RNA wirusa SARS CoV2 z wymazów

Zawartość pojedynczego pudełka umożliwia przeprowadzenie 98 izolacji.

X.Total RNA Extraction from Virus20200206(Mini480 Auto12S.pdf